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【最新论文分享】《血液透析系统内毒素检测及其浓度含量》

发布时间:2019-08-07
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文章首次发表于

《中国医学装备》杂志

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文中实验所用内毒素检测试剂盒、鲎试验微生物快速检测系统(ELx808IULAXH)及无热原耗材均为(厦门鲎试剂生物科技股份有限公司)产品


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文章来源与王苏湘等几位老师,如有侵权联系删除!

血液透析系统内毒素检测及其浓度含量控制


王苏湘 滕朝宇 吴瑕 王宇 (排名不分先后)

[文章编号]1672-8270(2019)07-0059-06[中图分类号]R197。39[文献标识码]A

关键词:

血液透析;内毒素检测试剂盒;厦门鲎试剂;厦门鲎试剂凝胶法鲎试剂;厦门鲎试剂动态浊度法鲎试剂盒;厦门鲎试剂鲎试验微生物快速检测系统ELx808IULALXH;标准要求;内毒素控制


摘要

目的:依据血液透析治疗对内毒素的相关标准要求,采用鲎试剂法对透析液的内毒素含量进行检测,基于戴明循环(PDCA)管理模式加强对透析治疗过程管控,以提高透析治疗的医疗质量。


方法使用透析专用鲎试剂(凝胶法)对内毒素进行定性及半定量检测,动态浊度法鲎试剂检测内毒素浓度,根据国际标准及行内标准,判断所测的透析液是否合格。

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内毒素与血液净化

1.1内毒素与鲎试剂法


鲎试剂法是目前测定内毒素的主要方法,该方法检测内毒素特异性强、灵敏度高且操作方法简便,美国药典(USP)和中国药典(CP)均已收载。检测方法有凝胶法和光度测定法,光度测定法又包括浊度法和显色基质法。鲎试剂中的C因子能够与内毒素反应,激活B因子,活化后的B因子使凝固酶原变成凝固酶,凝固蛋白原在凝固酶的作用下形成凝固蛋白,最终形成凝胶。


1.2内毒素污染来源

与透析有关的内毒素污染来源主要包括以下4个方面。

(1)水前处理系统。透析用水的处理系统包括沉淀过滤器、软水器、活性碳过滤器等水质前处理系统,以及逆渗透膜系统或去离子器和超过滤器等。

(2)反渗水输送管道。管径大小、材质和结构的不同会造成细菌滋生,甚至会形成生物膜附着在管路的表面而有利细菌的滋生,污染复用用水。

(3)透析浓缩液配制的过程环节,透析浓缩液的污染,重碳酸盐透析液非常容易滋长细菌。

(4)透析机的污染,上下机及两班连台之间的消毒控制。


1.3内毒素超标的临床表现

血液透析设备系统消毒过程中透析用水、透析浓缩液及透析液内毒素超标会将内毒素带入尿毒症患者血液,导致尿毒症患者产生内毒素血症。内毒素作用于吞噬细胞、中性粒细胞、内皮细胞、血小板、补体系统以及凝血系统,并诱生肿瘤坏死因子a(tumor necrosis factor-x,TNF-a)、白细胞介素-1(interleukin,IL-1)、IL-6和IL-8、组胺以及激肽等生物活性物质,使组织器官毛细血管灌注不足,出现缺氧及酸中毒等。


高浓度的内毒素也可激活补体替代途径,引发高热、低血压以及活化凝血系统,最后导致弥散性血管内凝血。严重时可导致微循环衰竭和低血压为特征的内毒素休克甚至死亡。发现后要检查原因,感染者应给予抗感染治疗。


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研究材料和方法


2.1 检测样本及样品收集


(此处省略部分内容,如有兴趣了解,可联系我司获取此部分内容。)

联系方式:

厦门鲎试剂销售热线:0592-2085561

也可到我们的官网留言:www.buyigea.com

或添加我们群秘书微信:18059280646

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2.2 仪器与试剂

采用ELx808IULALXH型鲎试验微生物快速检测仪(美国Bio-Tek公司授权厦门鲎试剂生物科技有限公司代理出售);涡旋振荡仪;恒温水浴锅。透析专用鲎试剂检测试剂盒(0.25EU/ml,Lot No 130725,Lot No 140825)、透析专用鲎试剂检测试剂盒(0.5EU/ml,Lot No 120916,Lot No140705)、透析专用鲎试剂检测试剂盒(2EU/ml,Lot No130620,Lot No 140825,Lot No 151201)和动态浊度法鲎试剂盒(Lot No180627B)均来源于厦门鲎试剂生物科技股份有限公司。细菌内毒素工作标准品,无热原吸头,细菌内毒素检查用水,无热原板条,无热原接收管。


2.3 透析相关细菌内毒素限值

(此处省略部分内容,如有兴趣了解,可联系我司获取此部分内容)


2.4 凝胶法检测内毒素(透析专用鲎试剂)


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(1)阴性对照溶液的制备。

(2)阳性对照溶液的制备。

(3)样本溶液的制备。用无热原采样瓶收集适量的透析用水或透析液。按鲎试剂的灵敏度(入)及样本的内毒素限值(L)计算样品的最大有效稀释倍数(maximum allowable dilution,MVD),其计算为公式1:MVD=L/入

(4)样本阳性对照溶液的制备。

(5)实验操作。从试剂盒内取出8支鲎试剂,开启,设置检查项目及加样见表1。微信图片_20190731093451.png


(6)结果判断。将安瓿从恒温水浴锅中轻轻取出,缓慢倒转180°。若安瓿内的内容物呈坚实凝胶,不变形,不从管壁滑脱者为阳性,记录为(+);不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性,记录为(一)。


(7)当阴性对照管结果均为阴性,阳性对照管和样品阳性对照管为阳性,实验有效,否则无效,应重复实验。


2.5动态浊度法检测内毒素


(1)程序设置。

(2)标准曲线制备。

(3)标准曲线及样品检测。

(4)数据处理。

设定启动OD(一般设定为0。02),软件自动给出启动时间。建立标准曲线为公式2:

y=-ax+b(2)

式中y为启动时间的对数值,x为内毒素浓度的对数值,a为直线斜率,b为y轴截距。

当阴性对照的反应时间大于标准曲线最低浓度的反应时间,标准曲线的相关系数|r|≥0.980,标准曲线成立。


3结果


3.1透析专用鲎试剂(凝胶法)

检测2014-2017年采用3种规格透析专用内毒素凝胶法检测试剂盒检测结果见表2。(数据有删减)

检测数据表明,严格执行相关标准及操作规程后,

2014-2017年透析用水及透析液检测结果均为阴性合格。


3.2动态浊度法检测

内毒素浓度标准曲线中Y=-0.2593X+2.938

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